Określenie pozostałości β-agonistów w wieprzowinie za pomocą Wayeal LCMS-TQ9200 System chromatografii ciekłej-tandemowej spektrometrii masy

Ten eksperyment odnosi się do "GB 31658.22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkWyniki eksperymentalne wskazują, że badanie przydatności systemu wykazało dobrze ukształtowane szczyty i dobrą liniowość, spełniające wymagania eksperymentalne.Powtarzalność czasu retencji dla standardowego działającego roztworu beta- agonista była mniejsza niż 1%.W przypadku roztworu testowego wrażliwości agonistów β stosunek sygnału do hałasu głównych szczytów w stężeniach 0.2 ng/ ml i 0,5 ng/ ml były znacznie większe niż odpowiednio 3 i 10, spełniając wymagania eksperymentalne.

W badaniu próbki wieprzowiny nie wykryto agonistów β. Wszystkie powyższe dane spełniają wymagania dotyczące przyrządów określone w standardowej metodzie.

Kluczowe słowa:Płynna chromatografia-spektrometria masowa tandem; agonisty β; klenbuterol; bezpieczeństwo żywności.

1Instrumenty i odczynniki

1.1 Wykaz konfiguracji LCMS

Tabela 1 Wykaz konfiguracji przyrządów

1.2 Odczynniki i normy

Tabela 2 Wykaz czynników i standardów

1.3 Materiał eksperymentalny i sprzęt pomocniczy

Ultrasonic Cleaner

Mieszalnik wiru

Wodny kąpiel stała temperatura Shaker

Centryfuga dużych prędkości

2Metoda eksperymentalna

2.1 Wykonanie wstępnej obróbki próby

2.1.1 Hydroliza i ekstrakcja enzymatyczna

Zważyć 2 g próbki (z dokładnością ± 0,05 g) do rurki odśrodkowej o pojemności 50 ml. Dodać 6 ml roztworu buforowego 0,2 mol/l octanu amonu i 40 μl β-glukuronidazy/arylosulfatazy.i inkubować w ciemności w temperaturze 37°C w kąpieli wodnej przez 16 godzin. Pozwól schłodzić do temperatury pokojowej do późniejszego użycia.

2.1.2 Ekstrakcja, oczyszczanie i koncentracja

Weź przygotowany roztwór, dodaj 100 μL wewnętrznego standardowego roztworu roboczego 100 ng/mL, wstrząśnij, aby dokładnie zmieszać, i odśrodkowuj w temperaturze 8000 r/min przez 8 minut. Zbierz nadmiernik, dodaj 5 mL 0.1 mol/l roztworu kwasu chlorowego, wir do zmieszania i ustawić pH do 1,0 ± 0,2 przy użyciu kwasu chlorowego. Po odśrodkowaniu w temperaturze 8000 r/min przez 8 minut, ustawić pH nadnastającego na 10 ± 0.5 przy użyciu roztworu wodorotlenku sodu 10 mol/l. Dodać 15 ml octanu etylu, wstrząsnąć średnią prędkością przez 5 minut, i odśrodkować w 5000 r/min przez 5 minut. Zbierać górną warstwę organiczną.dodaje się 10 ml eteru metylowego tert-butylu, wstrząsnąć średnią prędkością przez 5 minut, odcentryfikować w temperaturze 5000 r/min przez 5 minut, zbierać górną warstwę organiczną, połączyć wszystkie warstwy organiczne i odparować do wyschnięcia pod strumieniem azotu w temperaturze 50°C.Pozostałość rozpuszczamy w 5 ml 2% roztworu kwasu mrówkowego i odkładamy.Przygotować kolumnę ekstrakcyjną w fazie stałej wymiany kationowej w trybie mieszanym poprzez kolejne aktywowanie jej 3 ml metanolu i 3 ml kwasu mrówkowego 2%.następnie płukać 3 ml 2% kwasu mrówkowego i 3 ml metanolu, a następnie osuszyć pod próżnią. Eluować kolumnę 3 ml 5% roztworu metanolu amoniowanego. Wyparować eluat do wyschnięcia pod strumieniem azotu w temperaturze 50 °C. Ponownie rozpuścić pozostałość w 0,5 ml metanolu ¥0.1% roztwór kwasu mrówkowego (10:90, v/v), dokładnie zmieszać i filtrować przez mikroporową membranę o długości 0,22 μm do analizy za pomocą chromatografii ciekłej i spektrometrii masowej tandemowej.

2.2 Warunki eksperymentalne

2.2.1 Warunki chromatograficzne płynne

Kolumna chromatograficzna ∆ C18, 1,8 μm 2,1*100 mm

Faza ruchoma: A: 0,1% kwasu mrówkowego w wodzie; B: metanol

Przepływ: 0,3 ml/min

Temperatura kolumny: 40°C

Objętość wstrzyknięcia: 3 μl

3Badanie przydatności systemu

Badanie przydatności systemu wykazało, że szczyty docelowe są dobrze ukształtowane bez ingerencji innych szczytów zanieczyszczeń, spełniając wymagania eksperymentalne.

Rys. 1 Chromatogram badań siedmiu β-agonistów (1 ng/mL)

3.2 Zakres liniowy

Przyjmując roztwory standardowe beta-agonistów i stosując roztwory robocze o średnim stężeniu, przygotowano stopniowo krzywą standardową.z R2 > 0.99, co wskazuje na dobrą relację liniową.

Tabela 3 Tabela przedziałów liniowych dla β-agonistów

Rys. 2 Chromatogram Standard Curve siedmiu β-agonistów

3.3 Limit wykrywania (LOD) i limit ilościowy (LOQ)

W tej metodzie limit wykrywalności (LOD) i limit ilościowy (LOQ) dla β-agonistów ustala się odpowiednio na 0,2 ng/mL i 0,5 ng/mL.stosunek sygnału do hałasu przy określonych stężeniach dla LOD i LOQ jest większy niż 3 i 10, odpowiednio spełniające wymagania dotyczące wrażliwości eksperymentalnej.

Tabela 4 Odpowiednie stosunki sygnału do hałasu dla LOD i LOQ każdego związku

Rys. 3 Chromatogramy jonowe siedmiu β-agonistów w stężeniach LOD i LOQ

3.4 Badanie precyzji

W celu porównania czasu retencji i odchylenia obszaru szczytowego zastosowano mieszaninę substancji standardowych β- agonistów w niskim, średnim i wysokim stężeniu i wstrzykiwało się ją sześć razy z rzędu.Wyniki przedstawiono w poniższej tabeliWszystkie agonisty β wykazywały odchylenia czasu retencji mniejsze niż 1% i odchylenia obszaru szczytowego mniejsze niż 3%, co spełniało wymagania eksperymentalne.

Tabela 5 Badanie precyzyjności dla każdego związku

Rys. 4 Dokładne badanie chromatogramów siedmiu β-agonistów (6 wstrzyknięć)

3.5 Badanie próbki

Próbki mięsa wieprzowego zakupione na rynku zostały poddane badaniom zgodnie z wspomnianą metodą wstępnej obróbki i nie wykryto agonistów β.Nie zaobserwowano szczytów chromatograficznych w czasie retencji odpowiadającym siedmiu agonistom β., podczas gdy pozostałe szczyty reprezentują sygnały macierzy po hydrolizie enzymatycznej.

Rys. 5 Chromatogram badawczy próbki wieprzowiny

4Wniosek

Metoda ta wykorzystuje układ spektrometrii masowej ciekłej chromatografii-tandem Wayeal LCMS-TQ9200 do określania β-agonistów w wieprzowinie.Dane pokazują, że wszystkie szczyty chromatograficzne wykazują dobry kształt bez odchylenia, wrażliwość spełnia wymagania eksperymentalne, współczynniki korelacji liniowej przekraczają 0.99, a dokładność jest zadowalająca przy odchyleniach czasu retencji poniżej 1% i odchyleniach powierzchni szczytowej w zakresie do 3% dla sześciu kolejnych wstrzyknięć każdego związku.W badaniach próbki wieprzowiny nie wykryto agonistów βWyniki te wskazują, że metoda, wyposażona w system Wayeal LC-MS/MS, spełnia rutynowe wymagania dotyczące wykrywania jakościowego i ilościowego analitycznych celów.