Określenie zawartości kofeiny w napojach za pomocą chromatografii ciekłej

Szczegóły sprawy

Kofeina jest naturalnym alkaloidem metyloksantyny, powszechnie występującym w surowcach takich jak ziarna kawy, liście herbaty i ziarna kakao.Służy jako podstawowy dodatek funkcjonalny i charakterystyczny związek smakowy w dostępnych w handlu napojachUmiarkowane spożycie kofeiny może wywierać fizjologiczne skutki, takie jak odświeżanie umysłu i łagodzenie zmęczenia.Jednakże, nadmierne i długotrwałe spożycie może łatwo wywoływać reakcje niepożądane, w tym pulsacje serca, bezsenność i nadwrażliwość nerwową.dzieci, a osoby z chorobami układu krążenia mają jeszcze niższe progi tolerancji.Standardy bezpieczeństwa żywności w różnych krajach ustanowiły jasne ograniczenia regulacyjne zawartości kofeiny w napojach.

W Chinach obowiązuje krajowa norma bezpieczeństwa żywności zatytułowana "Ustalenie kofeiny w napojach" (GB 5009.139-2014) stanowi podstawę ustawową do ilościowego określania kofeiny w matrycach napojów. Wysokiej wydajności chromatografia ciekła (HPLC), ze względu na doskonałą rozdzielczość, silną zdolność do przeciwdziałania zakłóceniom macierzy i wysoką dokładność ilościową,stała się metodą wyboru do analizy próbek złożonych macierzy, w tym różne napoje mieszane, napoje zawierające mleko i ziołowe napoje funkcjonalne.Badanie to przeprowadzono zgodnie z metodą chromatografii ciekłej o wysokiej wydajności określoną w krajowej normie GB 5009.139-2014, ustanawiająca protokół wstępnej obróbki próbek i płynnej separacji chromatograficznej/wykrywania próbek napojów,i dokonywanie jakościowej identyfikacji i ilościowej analizy kofeiny w różnych rodzajach napojów.

Słowa kluczowe: wysokowydajna chromatografia ciekła; kofeina; napoje; określenie zawartości.

1Instrumenty i odczynniki

1.1 Wykaz konfiguracji systemu chromatografii ciekłej

Tabela 1. Wykaz konfiguracji przyrządów

Nie, nie, nie.	Nazwa	Kty
1	System chromatografii ciekłej LC3500	1
2	P3500B Dwuwymiarowa pompa wysokiego ciśnienia	1
3	CT3500 Piekarnik kolumnistyczny	1
4	AS3500 Ultra-High Performance Autosampler	1
5	SmartLab CDS 2.0 Chromatografia Data Station	1
6	C18 Kolumna, 5μm, 4,6 × 250 mm	1

1.2 Wykaz czynników i norm

Tabela 2. Wykaz czynników i standardów

Nie, nie, nie.	Odczynnik lub norma odniesienia	Stopień czystości
1	Metanol	Klasa LC
2	Woda ultraczysta	/
3	Tlenek magnezu	Klasa AR
4	Kwas trójchlorooctowy	Klasa AR

1.3 Materiały eksperymentalne i sprzęt pomocniczy

czyszczący ultradźwiękowy;

Mieszalnik wirusowy;

0.45μm mikroporowa membrana filtrująca wodną fazę.

2Metody eksperymentalne

2.1 Przygotowanie rozwiązań standardowych

2.1.1 Standardowy roztwór zapasowy kofeiny (2,0 mg/mL): Dokładnie waż 20 mg standardowego zapasu kofeiny (z dokładnością 0,1 mg) w kolbie objętościowej o pojemności 10 ml, rozpuszczaj i uzupełniaj do objętości metanolu.Przechowywać w lodówce w temperaturze 4°C. Okres trwałości wynosi 6 miesięcy.

2.1.2 Standardowy roztwór pośredni kofeiny (200μg/mL): Dokładnie przeniesić 5,0 ml standardowego roztworu podstawowego kofeiny (2.1.1) do kolby objętościowej o pojemności 50 ml i uzupełnić do objętości wodą.°C. Okres trwałości wynosi 1 miesiąc.

2.1.3 Standardowe roztwory robocze kofeiny do krzywej kalibracyjnej: Przeniesienie 0,5 ml, 1,0 mL, 2,0 mL, 5,0 mL i 10,0 mL standardowego roztworu pośredniego kofeiny (2.1.2) do oddzielnych kolb objętościowych o pojemności 10 ml i uzupełnić do objętości wodą.0μg/ml, 20.0μ40 g/ml.0μg/ml, 100μg/mL i 200μPrzygotować bezpośrednio przed użyciem.

2.2 Wstępna obróbka próby

2.2.1 Napoje typu cola

(a) Odgazowanie: Sonicate próbki za pomocą ultradźwiękowego oczyszczacza w 40 °C°C na 5 minut.

b) Oczyszczanie: Zważyć 5 g próbki (z dokładnością do 0,001 g), przenieść do kolby objętościowej o pojemności 5 ml,i uzupełniać wodą do objętości (zapewniając, że zawartość kofeiny w roztworze próbki znajduje się w zakresie krzywej kalibracyjnej). Dokładnie wymieszać. Dodać 0,5 g tlenku magnezu, dobrze potrząsnąć i pozostawić w stanie stojąco.

2.2.2 Płynne produkty z kawy i herbaty zawierające mleko

Zważyć 1 g próbki (z dokładnością do 0,001 g), przenieść do kolby objętościowej o pojemności 10 ml,i uzupełniać do objętości roztworem kwasu trójchlorooctowego (zapewniając, że zawartość kofeiny w roztworze próbki znajduje się w zakresie krzywej kalibracyjnej). dokładnie zmieszać i pozostawić na wysiadanie białka. wziąć nadmiernik i filtrować przez błonę mikroporową do późniejszej analizy.

2.3 Warunki eksperymentalne

2.3.1 Warunki chromatograficzne

Kolumna: C18, 4.6×250 mm, 5μm

Faza ruchoma: metanol/woda = 24/76 (v/v)

Przepływ: 1,0 ml/min

Temperatura kolumny: 25°C

Długość fali wykrywania: 272 nm

Objętość wstrzyknięcia: 10μL

3Wynik eksperymentu.

3.1 Blank