Oznaczanie analogu hydroksylowego metioniny w paszy metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej firmy Wayeal

Methionina hydroxy analog (MHA) jest dodatkiem kwasu organicznego szeroko stosowanym w przemyśle paszowym jako substytut metioniny.świnie (prosiątki i świnie końcowe), przeżuwaczom (w przypadku bydła mlecznego i bydła mięsnego) oraz akwakultury (w przypadku ryb i krewetek).poprawa stanu jelit zwierząt, oraz wzmocnienie odporności zwierząt.

Wysokiej wydajności chromatografia ciekła w połączeniu z wykrywaniem UV jest odpowiednia do analizy różnych złożonych próbek pasz, ze względu na doskonałą wydajność separacji,silna odporność na zakłócenia macierzy, wysoka czułość wykrywania i stabilne i wiarygodne wyniki ilościowe.Badanie to przeprowadzono zgodnie ze standardem "Określenie metioniny hydroxy analogu w paszy przez wysokowydajnej chromatografii ciekłej" (GB/T 19371-2025).. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, umożliwiające zarówno wykrycie jakościowe, jak i precyzyjną analizę ilościową analogu metioniny w różnych typach próbek pasz.

Słowa kluczowe: pasza paszowa; analogi metioniny hydroxy; wysokowydajna chromatografia ciekła.

1Instrumenty i odczynniki

1.1 Wykaz konfiguracji HPLC

Tabela 1 Wykaz konfiguracji systemu chromatografii ciekłej o wysokiej wydajności

1.2 Wykaz czynników i norm referencyjnych

Tabela 2 Wykaz czynników i norm referencyjnych

1.3 Warunki chromatografii ciekłej

Tabela 3 Warunki chromatografii ciekłej o wysokiej wydajności

1.4 Materiały eksperymentalne i sprzęt pomocniczy

czyszczący ultradźwiękowy;

Mieszalnik wirusowy;

Centrifugę dużych prędkości;

bilans analityczny;

Shaker.

2Metody eksperymentalne

2.1 Przygotowanie roztworu

2.1.1 Rozwiązania krzywej standardowej:

Dokładnie ważą się odpowiednią ilość metioniny hydroxy analogu standardowego i rozpuszczają go w 10% acetonitrylu w celu przygotowania serii roztworów standardowych w stężeniach masowych 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0, 20.0- 40 lat.0, i 80.0μg/mL. Dokładnie przeniesić 5 ml każdego roztworu standardowego do zamkniętych probówek o pojemności 15 mL oddzielnie. Dodać 0,1 ml 50% roztworu wodorotlenku potasu dokładnie i wirzyć przez 15 sekund.Następnie dokładnie dodać 0.2 mL 50% roztworu kwasu fosforanowego i wir przez kolejne 15 sekund. Odśrodkować w temperaturze 8000 r/min przez 5 minut. Przed analizą przeprowadzić nadmiernik przez mikroporowy filtr membranowy.

2.1.2 Roztwory próbki testowej:

5 g próbki paszy jest ważone w pojemniku, dodaje się 50 ml 10% roztworu acetonitrylu i miesza się przez 30 sekund. Umieszcza się ją na wstrząsaczce i wstrząsa przez 30 minut.i zachować substancję nadmierną do późniejszego użycia. Dokładnie przenieść 5 ml powyższego nadmiernego substancji do zamkniętej probówki o pojemności 15 ml. Dokładnie dodać 0,1 ml 50% roztworu wodorotlenku potasu i wiru przez 15 s. Następnie dokładnie dodać 0.2 ml 50% roztworu kwasu fosforanowego i wir przez kolejne 15 s. Centrifuguj w temperaturze 8000 r/min przez 5 minut. Przed analizą przepuszczaj nadmiernik przez mikroporowy filtr membranowy. Przygotuj dwa równoległe roztwory próbek.

2.1.3 Rozwiązania do badań odzysku:

Dokładnie przenieść 2,5 ml nadmiaru próbki i 2,5 ml każdego roztworu z serii standardowej do zamkniętej probówki o pojemności 15 ml. Dokładnie dodać 0.1 ml 50% roztworu wodorotlenku potasu i wir przez 15 sNastępnie dokładnie dodać 0,2 ml 50% roztworu kwasu fosforanowego i wir przez kolejne 15 s. Odśrodkować w temperaturze 8000 r/min przez 5 minut.Przed badaniem przepuszcza się substancję nadmierną przez mikroporowy filtr błonowy..

3Wynik eksperymentu.

3.1 Liniowość i zasięg

Tabela 4 Tabela stężenia krzywej standardowej

Rys. 1 Standardowa krzywa metioniny hydroxy analogu

Uwaga: Odpowiednie ilości metioniny hydroxy analogu roztworu standardowego odniesienia zostały pobrane i seryjnie rozcieńczone do szeregu stężeń w celu przygotowania krzywej standardowej.Zakres linearny wynosił 0.5/80.0μg/mL, a współczynnik korelacji (R) wynosił 0.99983, co wskazuje na doskonałą liniowość analitu.

3.2 Dokładność

Rys. 2 Naklejone chromatogramy badania precyzyjności dla normy referencyjnej (20,0 μg/mL)

Tabela 5 Dane z badań precyzyjnych dla normy referencyjnej (20,0 μg/mL)

Uwaga: Standard referencyjny metioniny hydroxy analogu (w stężeniu 20.0μPowtórność (RSD) czasu retencji wynosiła 0,084%, a wiersz szczytowy wynosił 0,391%, co wskazuje na dobrą precyzję przyrządu.

3.3 Odzyskanie

Rys. 3 Nałożone chromatogramy badania odzysku metioniny w paszy

Tabela 6 Dane z badań odzysku metioniny w paszy

Uwaga: Próbkę dopasowano do standardu referencyjnego w stężeniu 40.0μWynik wynosił 88,56%, co wskazuje na dobrą dokładność metody.

3.4 Granica wykrywalności (LOD)

Rys. 4 Chromatogram metioniny hydroxy analogu standardowego (2.5μg/mL)

Tabela 7 Dane z badań metioniny hydroxy analog standard referencyjny (2.5μg/mL)

Uwaga: Na podstawie danych z badań metioniny hydroxy analog standard referencyjny w 2,5 μg/ml, jak pokazano w tabeli powyżej, teoretyczny limit wykrywania (LOD) został obliczony na 0.033 μg/mL przy stosunku sygnał-hałas 3 (S/N = 3).

3.5 Badanie próbki paszy

Rys. 5 Chromatogram próbki paszy

Uwaga: Metionina Hydroxy Analog została wykryta w próbce paszy w stężeniu 0.402μg/mL.

4Wniosek

Badanie to przeprowadzono zgodnie ze standardem "Określenie metioniny hydroxy analog w paszach przez wysokowydajną chromatografię ciekłą" (GB/T 19371-2025),wykorzystując wysokowydajny chromatograf ciekły serii Wayeal LC3400 wyposażony w detektor UVWyniki eksperymentalne wykazały, że szczyt docelowy wykazywał dobrą symetrię i wysoką teoretyczną liczbę płyt.5/80.0μw g/ ml współczynnik korelacji (R) był powyżej 0.9998Wartości RSD dla czasu retencji i obszaru szczytowego normy referencyjnej MHA (20.0μWynik MHA w próbkach paszy wzrósł do 40.0μTeoretyczny limit wykrywalności (LOD) MHA został ustalony na poziomie 0.033μMHA z powodzeniem wykryto w próbce paszy w stężeniu 0.402μWszystkie powyższe dane spełniają wymagania metody farmakopei dotyczące wydajności przyrządów.