Oznaczanie Urydyny 5'-Monofosforanu w Wzbogacaczach Żywności Metodą Wysokosprawnej Chromatografii Cieczowej

Jako nukleotyd, 5'-monofosforan urydyny (UMP) jest kluczowym związkiem pośrednim w metabolizmie kwasów nukleinowych w organizmach żywych. Jest to najobficiej występujący nukleotyd w mleku ssaków, a zapotrzebowanie dietetyczne na urydylan jest znacznie wyższe niż na inne nukleotydy podczas wzrostu i rozwoju potomstwa. W ostatnich latach badania wykazały, że UMP nie tylko uczestniczy w metabolizmie energetycznym i syntezie RNA, ale także poprawia funkcję bariery jelitowej poprzez modulowanie szlaków sygnałowych komórek. Ponadto działa synergistycznie z witaminami rozpuszczalnymi w tłuszczach, aby promować wchłanianie składników odżywczych i funkcje odpornościowe. UMP jest powszechnie dodawany jako wzmacniacz odżywczy do mieszanek dla niemowląt oraz pasz dla zwierząt gospodarskich/drobiu, gdzie jego czystość i stężenie bezpośrednio wpływają na wartość odżywczą i bezpieczeństwo produktu końcowego.

Słowa kluczowe:Wzmacniacz odżywczy żywności, UMP, Nukleotydy, Wysokosprawna chromatografia cieczowa.

1. Instrumenty i odczynniki

1.1 Lista konfiguracji HPLC

Tabela 1 Lista konfiguracji HPLC

1.2 Odczynniki i standardy

Tabela 2 Lista odczynników i standardów

1.3 Materiał eksperymentalny i sprzęt pomocniczy

Myjka ultradźwiękowa

Mieszadło wirowe

2. Metoda i warunki eksperymentu

Kolumna chromatograficzna: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Wynik eksperymentu

3.1 Test przydatności systemu

Test przydatności systemu wykazał, że docelowy pik był dobrze ukształtowany, z wysoką liczbą teoretycznych półek i brakiem nakładających się pików w jego pobliżu, spełniając tym samym wszystkie wymagania eksperymentalne.

Rys. 1 Chromatogram standardowego roztworu roboczego 5'-monofosforanu urydyny

Tabela 3 Wyniki testu dla standardowego roztworu roboczego 5'-monofosforanu urydyny

3.2 Test powtarzalności

Standardowy roztwór roboczy 5'-monofosforanu urydyny (UMP) wstrzyknięto sześć razy. Względne odchylenie standardowe (RSD) czasu retencji wynosiło 0.085%, a pole powierzchni piku 0.191%. Obie wartości były poniżej określonego limitu 2.0%, co wykazało zgodność z wymaganiami eksperymentalnymi.

Rys. 2 Chromatogramy testu powtarzalności 5'-monofosforanu urydyny (UMP)

Tabela 4 Wyniki testu powtarzalności dla 5'-monofosforanu urydyny (UMP)

3.3 Test próbki

Pole powierzchni piku standardowego roztworu roboczego 5'-monofosforanu urydyny (20mg/L) wynosiło 322.525, podczas gdy roztworu testowego 274.211. Na podstawie metody wzorca zewnętrznego, zawartość UMP w próbce określono na 17mg/L.

Rys. 3 Chromatogram próbki testowej

Tabela 5 Wyniki testu próbki

3.4 Test przydatności systemu dla substancji pokrewnych

Test roztworu przydatności systemu dla substancji pokrewnych wykazał, że wszystkie piki związków były dobrze ukształtowane, z wysokimi liczbami teoretycznych półek i rozdzielczością większą niż 2.0, spełniając tym samym wymagania eksperymentalne.

Rys. 4 Chromatogram standardowego roztworu roboczego 5'-monofosforanu urydyny (UMP)

Tabela 6 Wyniki testu dla standardowego roztworu roboczego 5'-monofosforanu urydyny (UMP)

3.5 Test powtarzalności próbki

Po sześciu kolejnych wstrzyknięciach roztworu przydatności systemu, powtarzalność czasu retencji dla 5'-UMP, uracylu i urydyny wynosiła odpowiednio 0.031%, 0.058% i 0.102%, podczas gdy powtarzalność pola powierzchni piku wynosiła odpowiednio 0.243%, 0.134% i 0.134%, spełniając wymagania eksperymentalne.

Rys. 5 Chromatogram testu powtarzalności próbki

Tabela 7 Wyniki testu powtarzalności czasu retencji substancji pokrewnych

Tabela 8 Wyniki testu powtarzalności pola powierzchni piku substancji pokrewnych

3.6 Test czułości dla substancji pokrewnych

Stosunek sygnału do szumu głównego piku 5'-UMP w roztworze testowym czułości dla substancji pokrewnych jest znacznie większy niż 3, spełniając wymagania eksperymentalne.

Rys. 6 Chromatogram roztworu testowego czułości substancji pokrewnych

Tabela 9 Wyniki testu roztworu czułości substancji pokrewnych

3.7 Testowanie roztworów odniesienia i próbek substancji pokrewnych

Pole powierzchni piku roztworu odniesienia (17 mg/L) wynosiło 275.856. Całkowite pole powierzchni piku zanieczyszczeń w roztworze testowym, z wyłączeniem 5'-monofosforanu urydyny, wynosiło 38.021. Obliczenia metodą wzorca zewnętrznego, zawartość zanieczyszczeń w próbce wynosi 2.343mg/L.

Rys. 7 Chromatogram testu roztworu odniesienia substancji pokrewnych

Tabela 10 Wyniki testu roztworu odniesienia substancji pokrewnych

Rys. 8 Chromatogram testu roztworu próbki substancji pokrewnych

Tabela 11 Wyniki testu dla roztworu próbki pokrewnej

4. Wniosek

W tym eksperymencie, w odniesieniu do "GB 1903.69-2024 Krajowy Standard Bezpieczeństwa Żywności: Wzmacniacz Odżywczy Żywności 5'-Monofosforan Urydyny", analiza została przeprowadzona przy użyciu systemu wysokosprawnej chromatografii cieczowej Wayeal LC3200 wyposażonego w detektor ultrafioletowy. Wyniki eksperymentu pokazują, że test przydatności systemu wykazał dobre kształty pików dla wszystkich związków, wysokie liczby teoretycznych półek i rozdzielczość powyżej 2.0, spełniając wymagania eksperymentalne. Powtarzalność czasu retencji dla standardowego roztworu roboczego 5'-Monofosforanu Urydyny i substancji pokrewnych była poniżej 0.2%, a powtarzalność pola powierzchni piku poniżej 0.3%, co wskazuje na dobrą powtarzalność. Roztwór testowy czułości dla substancji pokrewnych wykazał stosunek sygnału do szumu dla głównego piku 5'-Monofosforanu Urydyny znacznie większy niż 3, spełniając wymagania eksperymentalne. Wszystkie wyniki testów próbek były prawidłowe. Powyższe dane spełniają wymagania instrumentów określone w metodzie standardowej.